脑立体定位仪技术与大小鼠实验具体操作方法

实验原理   

        脑立体定位技术被广泛的运用于脑的损毁、刺激和脑电记录的精确定位中，成为研究脑结构和功能必不可少的工具。脑立体定位技术主要是使用脑立体定位仪作为定位仪器，利用某些颅骨外面的标志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢状缝等）或其它参考点所规定的三度坐标系统，来确定皮层下某些神经结构的位置，以便在非直视暴露下对其进行定向的刺激、破坏、注射药物、引导电位等研究，是神经解剖、神经生理、神经药理和神经外科等领域内的重要研究方法。常用的实验动物，如大鼠、小鼠、猫等高等哺乳动物以及鸟类，其均有完全的外耳道，可用（耳棒）来定位。在确定了颅外标记之后，就可按脑立体定位图谱所提供的数据进行定位操作。实验器材脑立体定位仪，MC-5微操作仪，常规手术器械，钻孔针，纱布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥钠（麻醉剂，现配现用），生理盐水，1ml注射器，3%双氧水， 小白鼠。

实验步骤

小鼠脑定位的系统大致分两种：

（1） 用耳间线中心定位，首先将两个耳棒尖端在定位仪滑道中间部位彼此相接触（两个耳棒读数相同），旋紧镙丝。然后取下一侧耳棒，另一耳棒不动。调节移动推进器，使校验电极尖端与耳棒尖端的中心点相触，即为A点（即耳间线中心点），并记下刻度值。然后，将推进器水平移动到门齿钩的上方，将门齿钩平面与校验电极尖端相触。这时就定出外耳道中心点与门齿牙板上面上沿之间的水平切面0点，记为H0。这时，动物的前囟和后囟基本处在一个水平面上，相差0-0.1mm。另外，规定耳间线中心点以上为+，向下为-；向嘴侧为+，向尾侧为-。

（2）用颅骨标志定位（常用前囟），即以前囟为嘴尾侧0点，由前囟向嘴侧为+，向尾侧为-，其它与上面定位方法相同。

 实验内容 

（1）动物麻醉：小鼠，体重20-30g，称重后以0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉注射时必须缓慢，随时注意动物状态。

（2）小鼠头部固定：将小鼠的门齿固定于脑定位仪上颌固定器，然后把一侧的耳捧推入动物的外道后，使动物的头在处于两滑道正中。再将另一耳捧推入另一侧的外耳道。这时观察两个耳棒的刻度一致后，将两耳棒上的固定螺丝扭紧，在将牙齿固定器上压鼻环 2 压下后扭紧（鼻环、耳棒的松紧度调节适宜为好），这时从各个方向推压动物头部"均不会出现移动。

（3）开颅钻孔前的备皮：剪去动物头部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作头部皮肤的消毒，沿矢状缝作一3cm长的皮肤切口，分离皮下组织，用双氧水清洁颅骨表面的筋膜及肌肉并剥离，推开骨膜，暴露前囟、人字缝及矢状缝。

（4）确定标准中线：将金属定位针向下移动到矢状缝上方后，再前后移动定位针，使定位针定位到前囟。

（5）小鼠海马定位：用定位针在前囟后2mm, 矢状缝旁开2.5mm处定位一点，即为海马的平面位置，然后在此点上用钻孔针在颅骨上钻一小圆孔。

（6）注射药物：小鼠海马则位于该圆孔下2 mm，将1ml注射器吸入药物安置到MC-5微操作仪上，操作仪器使注射器针头由小鼠脑钻孔处下降2mm时完成药物注射到小鼠脑海马处。

（7）制作脑组织切片：将小鼠脑制作成切片，显微观察小鼠脑中红染料位置来验证小鼠脑海马定位是否准确