SD 大鼠缺血性脑卒中假手术对照模型构建方案

一、 sham 手术标准化流程（改良对照法）

1. 麻醉与体位
   • 10% 水合氯醛（3.5ml/kg，ip）联合 2% 利多卡因（0.1ml 切口浸润）
   • 仰卧位固定，颈前区备皮，碘伏 - 酒精消毒 3 次
   • 术中维持肛温 36.8±0.5℃（体温维持仪控制）
2. 血管解剖操作
   • 颈前正中 2cm 纵切口，显微镊（精细度 0.1mm）分离胸骨舌骨肌
   • 暴露左侧颈总动脉（CCA）分叉部，游离颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）各 5mm（保留迷走神经）
   • 关键对照步骤：不结扎 ECA，仅用 8-0 丝线虚绕标记（模拟线栓操作但不插入）
   • 生理盐水冲洗术野，确认无出血后逐层缝合（皮肤用 6-0 可吸收线皮内缝合）
3. 术后复苏
   • 恒温毯（37℃）监护至自主睁眼，单笼饲养（避免模型组干扰）
   • 术后 6h 内每小时记录呼吸频率、角膜反射，皮下注射 0.9% NaCl（5ml/kg）补液

二、 假手术有效性验证（双盲评估）

三、 对照周期管理（与模型组同步）

• 急性期（0-24h）：每 2h 观察切口渗出，给予氨苄西林（20mg/kg，im）预防感染
• 亚急性期（2-3d）：每日称量体重（降幅＜5%），记录摄食量（≥15g/d）
• 特殊记录：手术耗时（精确至分钟，与模型组差值＜2min），出血量（棉球称重法＜0.1g）

四、 组织学对照检测（与模型组平行操作）

1. TTC 染色（术后 72h）
   • 取脑前经升主动脉灌流生理盐水 200ml，2mm 冠状切片（共 6 片）
   • 2% TTC 染色液（pH7.4，含 0.1% NaN3）37℃避光染色 25min
   • 图像处理：ImageJ 测量梗死体积（假手术组预期＜1% 脑体积）
2. 血脑屏障检测
   • 术后 72h 尾静脉注射 2% 伊文思蓝（4ml/kg），2h 后取脑
   • 脑组织匀浆离心（3000rpm，10min），分光光度计测上清 OD620 值
   • 假手术组 EB 含量＜5μg/g（模型组＞20μg/g）

五、 质量控制要点

1. 操作标准化：由同一术者完成（累计 MCAO 手术＞200 例），假手术操作增加 "血管分离 - 复位" 步骤（模拟线栓推送）
2. 盲法实施：神经评分、标本处理均由不知分组的实验员完成（双盲编码系统）
3. 统计学预设：假手术组与模型组比较采用独立样本 t 检验，P＜0.01 视为有意义差异